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MétroPol Allergènes M-441

Sommaire de la fiche

Cette méthode décrit l'analyse de la (des) substance(s) : Allergènes par UHPLC-MS/MS dans les : gants

Données de validation : Validation complète

Substances

Informations générales

Propriétés physico-chimiques
Nom N° CAS Formule chimique Classification CMR
Allergènes
Plus d'informations
Nom Masse molaire Densité Synonymes Fiche toxicologique
Allergènes

Familles de substances

  • ALLERGENES

Principe et informations

Cette méthode permet la recherche d'un allergène ou d'une famille d'allergènes dans un gant. Elle a été validée pour les 43 substances dont la liste se trouve dans les données de validation.

La méthode nécessite la maitrise d'un logiciel de traitement de données (MassLynx® WATERSTM ou équivalent).

Elle repose sur l'extraction du gant au solvant, la préparation de 11 mélanges étalons stabilisés et leurs injections successives dans les conditions MS/MS optimisées pour les allergènes qu'ils contiennent, et enfin l'injection systématique de l’échantillon, dans chacune des conditions MS/MS optimisées pour les différentes familles d’allergènes.

 

Principe de prélèvement et d'analyse

  • État physique

    Solide
  • Type de prélèvements

    Produit massif
  • Technique analytique

    CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE ULTRA HAUTE PERFORMANCE
  • Injecteur

    PASSEUR AUTOMATIQUE
  • Détecteur

    SPECTROMETRE MS/MS

Domaine d'application

Aucun domaine d'application défini.

Réactifs

  • ACETONE
  • ACETONITRILE
  • ACIDE ACETIQUE
  • EAU ULTRAPURE
  • METHANOL
  • SULFATE DE ZINC
  • THF

Consignes de sécurité pour les manipulations en laboratoire

Méthode d'analyse

Préparation d'analyse

  • Commentaires sur les étapes

    • Découpe du gant
    • Mise en solution de l'échantillon
    • Extraction des allergènes aux ultra-sons
    • Filtration de la solution extraite avant analyse
  • Conditions de conservation échantillon préparé avant analyse

    L'analyse doit être immédiate.

3 étapes de préparation :
Étape de préparation N°1
  • Type de préparation

    Découpe
  • Commentaires

    Découper le gant en morceaux de 2 à 3 mm, puis en peser une masse m = 0,5 g.

Étape de préparation N°2
  • Solvant ou solution

    • METHANOL
  • Type de préparation

    Mise en solution
  • Volume

    5 mL
  • Commentaires

    Pour quelques allergènes, le solvant de la solution mère est différent. Voir les données de validation.

Étape de préparation N°3
  • Type de préparation

    Extraction
  • Commentaires

    L'extraction se fait aux ultra-sons pendant 15 minutes à température ambiante.

    Filtrer ensuite une partie aliquote sur un filtre en PTFE de 0,2 µm. Transférer dans un un flacon de 2 mL pour l'injection.

Une condition analytique :

Condition analytique N°1
Les conditions analytiques utilisées lors du développement de la méthode sont fournies avec les données de validation.
  • Technique analytique

    • CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE ULTRA HAUTE PERFORMANCE
  • Injecteur

    • PASSEUR AUTOMATIQUE
  • Colonne

    • En PEEK
    • PHASE INVERSE
  • Détecteur

    • SPECTROMETRE MS/MS
  • Phase mobile

    • ACETONITRILE
    • ACIDE ACETIQUE
    • EAU TAMPONNEE
    • SULFATE DE ZINC
  • Commentaires, conseils ou condition particulières

    Le protocole repose sur la comparaison du résultat d’analyse de la solution extraite, aux résultats obtenus pour l'étalon préparé pour chacune des substances recherchées.
    Le protocole,  schématisé ci-dessous, comprend globalement une extraction à l’aide de méthanol, l’injection dans le système UHPLC-MS/MS de la solution extraite et son analyse dans 7 jeux de conditions optimisées. L'analyse des substances pures (étalons analytiques) est effectuée au cours du même essai, dans les conditions optimisées pour chaque allergène. Ces conditions sont détaillées dans les données de validation.

    • Injections des 11 mélanges étalons stabilisés (chacun contenant plusieurs des 43 substances recherchées associées de façon à ce qu'elles ne réagissent pas entre elles) successivement dans les conditions MS/MS optimisées pour les allergènes concernés.
    • Injections systématiques de l’extrait dans chacune des conditions MS/MS 1 à 7 optimisées (pour les différentes familles d’allergènes).

    La composition de ces mélanges et les conditions d’analyse (MS/MS 1 à 7) recommandées pour chaque mélange étalon sont décrites dans les données de validation.

     

     

Étalonnage et expression des résultats

La comparaison entre les spectres obtenus pour l'échantillon extrait et la réponse des allergènes étalons, permet la confirmation, ou non, de leur présence, l'identification et le dosage semi-quantitatif des allergènes extraits du gant.

  • Principe d'étalonnage

    externe
  • Commentaires

    Préparation d'une solution mère (environ 2,5 mg/mL) de chaque substance pure dans un solvant adapté *;

    Dilution dans le méthanol (ou un solvant plus adapté*) : solution fille d'un allergène seul.

    Mélange des solutions-filles : mélanges étalons stabilisés.

    Analyse de l'échantillon et des étalons dans des conditions strictement identiques*.

    * Les conditions opératoires optimisées, les solvants recommandés et la composition des mélanges étalons stabilisés, sont indiqués dans les données de validation.

    Exemple fourni pour le bis-dibutyldithiocarbamate de zinc (ZDBC)

    Masse mono-isotopique = 474 g/mol

    Mode de détection ES+

    Ion parent : m/z=471

    Ion fils : m/z = 116, m/z = 172 et m/z = 268.

     

    La fenêtre TargetLynx® de fin d’analyse du ZDBC est la suivante

     

    La transition 471>172 est la transition de détection et de quantification,

    Les transitions 471>116 et 471>268 sont des transitions de confirmation.

    A471>172 est l’aire du pic pour la transition 471>172,

    A471>116 est l’aire du pic pour la transition 471>116,

    A471>268 est l’aire du pic pour la transition 471>268,

     

     

    La confirmation de lidentité de lallergène dans lextrait nécessite la comparaison des ratios de réponse pour chaque transition avec ceux obtenus pour la substance pure analysée dans les mêmes conditions :

     

    • les ratios attendus (obtenus pour ZDBC étalon) sont les suivants :


    • les ratios calculés pour le ZDBC dans l’échantillon confirment l’identité de la molécule extraite :

     

    • Le dosage du ZDBC en µg/g repose classiquement sur le calcul suivant :

    avec :

    A ech = aire du pic (pour la transition de quantification) obtenu pour l’échantillon extrait

    A ref = aire du pic (pour la transition de quantification) obtenu pour la solution-fille de référence

    C = concentration de la solution-fille de référence µg/mL

    V = volume de la solution d’extraction du gant mL

    m = masse (g) de l’échantillon gant soumis à l’extraction.

     

    Le résultat de la recherche peut être fourni
    •  sous la forme d’un tableau détaillé présentant pour un gant donné, les allergènes identifiés en laboratoire et leur teneur respective ramenée au gant échantillon :

    • sous la forme de données synthétisées :

    • sous la forme d'un histogramme où les allergènes en faible concentration n'apparaissent pas, compte tenu des écarts entre les concentrations respectives :

    • sous la forme d'un histogramme groupé, plus visuel, avec des données de type logarithmique, qui permet de faire apparaitre l'ensemble des molécules détectées :

     

Historique

Version Date Modification(s) faisant l'objet de la nouvelle version
M-441 V/01 Décembre 2021 Création de la méthode

 

Date de mise à jour : novembre 2022