Une méthode simple de marquage fluorescent spécifique d’un type de cellule pour l’analyse de cellules en co-culture par cytométrie en flux

Introduction :
Les modèles de co-culture ont été largement utilisés pour évaluer la toxicité des fibres et des particules. Cependant, une fois que les lignées cellulaires sont mélangées dans le même puits de culture, il est difficile d’évaluer la toxicité différentielle des cellules sans utiliser des marqueurs cellulaires spécifiques, qui ne sont pas compatibles avec les tests nécessitant des cellules vivantes, comme le test de stress oxydant induit par les particules par cytométrie en flux.

Matériel et méthodes :
Des cellules épithéliales alvéolaires humaines (A549) ont été spécifiquement marquées avec un colorant de prolifération cellulaire, eFluor™ 670, avant d’être mélangées avec des THP-1 différenciés par des esters de phorbol (utilisés comme macrophages). Le modèle de co-culture a permis d’évaluer la toxicité de la silice cristalline DQ-12 et DQ-12-PVNO (les particules étaient recouvertes de polyvivylpyridine-N-oxyde, une molécule utilisée pour éteindre la réactivité de surface des particules). Le stress oxydant induit par les particules a été évalué par cytométrie en flux en utilisant une sonde de diacétate de 2’,7’-dichlorodihydrofluorescéine (H2DCFA).

Résultats :
Le traitement des cellules A549 avec une concentration non cytotoxique d’une sonde eFluor™ 670 a permis de différencier les cellules marquées et non marquées par cytométrie en flux. Le stress oxydant cellulaire induit par l’ester de phorbol ou le DQ-12 détecté par H2DCFA n’a pas été affecté par le traitement des cellules avec la sonde eFluor™ 670.

Conclusions :
Ce travail a montré que le marquage spécifique des cellules vivantes avant la mise en place de la co-culture permet d’effectuer des tests tels que l’évaluation du stress oxydant par cytométrie en flux sur différents types de cellules vivantes provenant des mêmes modèles de co-culture sans utiliser de marqueurs spécifiques au type de cellule. De tels essais seraient d’une grande utilité dans tout type de modèle avec de multiples types cellulaires dans lequel on recherche les effets de produits chimiques sur une population cellulaire donnée.