Développement d’une nouvelle méthode HPLC-HRMS pour l’analyse et la quantification du résorcinol dans les urines : application à l’exposition professionnelle dans le secteur de la coiffure

Le résorcinol est une molécule couramment utilisée dans de nombreux secteurs industriels, notamment dans les secteurs des cosmétiques et qui présente des effets perturbateurs endocriniens sur la fonction thyroïdienne. Le but de cette étude était de développer et valider une méthode sensible, sélective et robuste permettant de quantifier le résorcinol dans les urines et ainsi d’évaluer l’exposition professionnelle des coiffeuses à ce composé. Le résorcinol étant principalement excrété dans l’urine métabolisé sous forme glucuro ou sulfo-conjuguée, la première étape était de réaliser une hydrolyse des échantillons urinaires à l’aide d’une enzyme de type â-glucuronidase-arylsulfatase, durant 16 heures. Ensuite, après une étape d’extraction à l’aide de cartouches SLE (extraction liquide/liquide sur support solide, les échantillons étaient dérivés à l’aide de chlorure de dansyle, ce qui permet à la fois d’augmenter le signal et de diminuer le bruit de fond. L’analyse était réalisée à l’aide d’un chromatographe en phase liquide couplé à un spectre de masse à haute résolution, utilisant une colonne analytique Kinetex Biphenyl. Une attention particulière a été portée à la séparation chromatographique du résorcinol de ses deux isomères, le catéchol et l’hydroquinone, composés également présents dans les urines. L’acquisition était réalisée en ESI en mode positif, à m/z 577.14615 pour le résorcinol dansylé et à m/z 581.17126 pour le résorcinol-d4 dansylé, avec des temps de rétention respectifs de 8.63 et 8.60 minutes.

Cette méthode a passé avec succès tous les tests du protocole de validation. La limite de quantification (LLOQ) était de 0.3 µg/L de résorcinol, sensibilité suffisante pour quantifier le résorcinol dans tous les échantillons testés. Les courbes d’étalonnages étaient linéaires entre la LLOQ et 2000 µg/L, avec des coefficients de détermination R2 s’échelonnant de 99.82% à 100%. La méthode était précise, permettant d’atteindre entre 95.6 et 101.7% de le valeur cible en intraday et entre 99.8 et 105.0% en interday. Elle s’est aussi révélée robuste avec un effet matrice de 8.25%.
La stabilité du résorcinol a été évaluée en profondeur : à -20°C pour le stockage à long terme des échantillons avant analyse, à +4°C et +20°C pour le stockage à court terme. L’influence des cycles de congélation/décongélation et la possibilité de congeler les échantillons après dérivation ont également été vérifiées.
Cette méthode a été appliquée avec succès à des échantillons provenant de 17 coiffeuses. Dans ces échantillons, les concentrations urinaires variaient de 2 µg/L à 1824 µg/L (6 à 4475 µg/g créatinine) et étaient du même ordre de grandeur que celles citées dans la littérature.